Proteinextrakt aus  Embryonen (großer Maßstab)

1.   Embryonen auf Apfelsaftagarplatten sammeln (je nach Bedarf, z. B. 0-6h) und für bis zu drei Tage im Kühlraum lagern.
2.  Embryonen in kaltem Wasser mit einem festen Pinsel von der Platte loslösen.
3.  Embryonen in einem großen Sieb mit grobmaschigem Vorsieb (für die Fliegen) sammeln
4. mit reichlich Wasser waschen und in ein kleineres Sieb überführen
5.  mit Klorix das Chorion entfernen, ca.  2-3 min inkubieren
6. gründlich waschen und abtropfen lassen
7. Embryonen mit einem Spatel in ein den Dounce oder ein 50 ml Falcon überführen
8. abhängig vom Volumen der Embryonen mit Extraktionspuffer nachspülen
9.  ca. 10 Stöße im Dounce ,  geht anfangs recht schwer
10. in Falcon röhrchen überführen, zentrifugieren, 10 min, 4,5k, 4°C, Tischzentrifuge
11.  Überstand retten, Pellet in Extraktionspuffer suspendieren, nochmal mit Dounce homogenisieren
12. Reextract nochmal zentrifugieren,  10 min, 4,5k, 4°C, Pellet ist zweischichtig,
13. beide Überstände vereinen, sind recht trüb
14.   in Sorvall zentrifugieren in einem offenen Röhrchen,  15 min, 10k, 4°C
15. Fettschicht oben mit einem Tuch entfernen, der Überstand (=Lysat ist opaliszierend), das Pellet ist homogen
16.  Zuckerlösung zu 250mM zugeben, mischen
17. in flüssigem Stickstoff einfrieren, bei -80°C lagern