silberfärbung

Silberfärbung:

Arbeitsschritt	Zeit	Lösung	Entsorgung	Bemerkungen
Fixieren A	1 Std	125 ml d Wasser 100 ml Methanol (tech) 25 ml Essigsäure (tech)	Methanolabfall	- bei Cleangel 1.1 verdünnt - Ethanol kann ebenfalls verwendet werden
Fixieren B	30 min	213 ml d Wasser 25 ml Ethanol (tech) 13 ml Essigsäure (tech)	Ausguß
Fixieren C	2 x 15 min	225 ml d Wasser 25 ml Ethanol (tech)	Ausguß	anfangen, die Substanzen zu lösen
Färben A (Sensibilisieren)	1 min	250 ml d Wasser 125 µl Formaldehyd (37%) 105 µl Na-thiosulfat	Ausguß	Formaldehyd und Na-thiosulfat erst kurz vor dem Färben zugeben !!!
Waschen	2 x	fließend d Wasser	ausguß	wichtig
Färben B	6 min	250 ml d Wasser 0,5 g AgNO3 125 µl Formaldehyd (37%)	Silberabfall
Waschen	2 x	fließend d Wasser	Silberabfall
Entwickeln	5 - 10 min	250 ml d Wasser 15 g Na2CO3 2,5 µl Na-thiosulfat 125 µl Formaldehyd (37%)	Ausguß	Na2CO3 löst sich schlecht
Waschen	2 x	d Wasser	Ausguß
Stopplösung		230 ml d Wasser 12,5 ml Glycerin 7,5 ml Essigsäure	Ausguß	Stopplösung kann öfters benutzt werden.

d Wasser: deionisierte Wasser
Na-thiosulfat-Lösung: 675 mg Natriumthiosulfat x 5 H2O in 1 ml d Wasser lösen (bis 8 Wochen stabil)

In der Regel reicht der halbe Ansatz, um ein großes Gel zu färben.
Ref.: Rolf Lutz, FG Bujard

Siverstaining, suitable for mass spectrometry (M Fischer, FG Dobberstein)

    (* All solutions have to be prepared fresh)

    - Fix: Put gel in fixing solution for 30 min or o/n

             100 ml acetic acid
             400 ml ethanol (tech.)
             400 ml d. water

    - Wash: Wash 2 x d. water

    - Incubate for 2,5 min in Farmer Reducer Solution:

             a spatula tip of Kaliumhexacyanoferrate III
             a spatula tip of Sodiumthiosulfate
             250 ml d. water

    - Wash 2 x 5min with d. water

    - Stain: Incubate for 30 min in Silver Solution:

             0,1% AgNO3

    * Discard the solution in Silver waste !!

    - Wash: 2 x 30sec with d. water (not longer, otherwise silver is washed away!!!)

    - Equilibrate: 1 min in 2,5% Sodiumcarbonate

    - Process: Incubate in Formaldehyde solution until bands appear (3 -5 min):

             0,1 % (v/v) Formaldehyde (37%)
             2.5 % (w/v) Na2CO3

        * If bands appear too fast use less Formaldehyde for Processing.

    - Stop: Discard Formaldehyde solution, wash shortly with d. water and stop staining with:

             5 % acetic acid

       - After 15 min acetic acid can be replaced by d. water and the gel can be scanned and dried.

       - For Mass Spectrometry: (If necessary) store the gel in 1 % acetic acid solution at 4°C o/n<>